荧光滤光片的作用和怎么选择滤光片波段?

2020-05-14 21:00:44 @CJ-NMOT 690

在荧光光谱测试中滤光片的作用以及怎么选择滤光片波段呢?

荧光滤光片在荧光检测系统,生命科学仪器的关键元件,我们习惯荧光系统的各种滤光片统称为荧光滤光片,该镜片是由3个不同的滤光片组成的,主要有有激发滤光片,透过(发射)滤光片和二向色滤光片组成的。其中激发滤光片及发射滤光片是窄带通型滤光片,光谱是较窄的通带,一般8nm-10nm左右。主要是为了获得荧光能量或获得荧光成像,荧光滤光片特点是对干扰光的隔离度好,自发荧光干扰少。目前广泛用于PCR分析仪,荧光免疫分析仪,荧光显微镜等各种医疗分析和检测仪器中都会用到荧光滤光片。


激发滤光片的作用:

在荧光检测系统中,激发荧光的波长可通过的滤光片,现在采用带通滤光片,用于生命科学和生物医学领域,主要作用是在生物医学荧光检验分析系统中分离和选择物质的溦发光与发射光的特征波段光谱。


发射滤光片的作用:

发射滤光片选择并传输样本发出的荧光特征,其他波段光线截止。发射光的波长比激发光的波长要长。我们选择荧光发射滤光片可以选择带通滤光片或者长波通滤光片作为发射滤光片。


二向色滤光片的作用:

或称二色镜或分色镜,在检测系统的光路呈45°角放置。二向色滤光片反射一种激发光并且透射发射光,激发光的反射率大于90%,发射光的透射率大于90%。光谱中不能透过的部分被反射而不是被吸收,滤光片在透射光和反射光下的颜色互为补色,因而又称二向色滤光片。

荧光滤光片的工作原理

通道荧光探针EX激发滤光片波长(nm)EM发射滤光片波长(nm)DM二向色镜(nm)
绿色FAM492518505
FITC(Fluorescein)495519507
Alexa Fluor 488499520510
黄色JOE520548534
VIC538554546
HEX533559546
TET521542532
CAL Flour Orange 560538559549
橙/红ROX578604591
Cy3554566560
Cy 3.5578591585
Alexa Flour 568578603591
深红Cy5649666658
Quasar 670647670569
Alexa Flour 633632647640
Cy5.5672690681
Cy7753775764
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荧光滤光片滤光片选型的一般原则是在成像端尽可能让荧光,发射光透过,同时尽可能阻挡激发光,从而获得高信噪比信号。一般会建议激发滤光片和发射滤光片的透射光谱有一定的距离,纳宏光电推荐选择8nm-12nm带宽。

我们在判断滤光片的参数一般会看透射率光谱,但往往荧光相对于激发光的强度非常弱,因此选择滤光片更需要参考阻挡深度光谱图,OD值,OD值更能直观地反映滤光片对光的阻挡特性。在选择激发滤光片和发射滤光片时,两者的阻挡深度光谱交点(OD交点)是重要的判断标准,一般要求宽场光源激发时交点OD值大于5,激光激发时大于OD6,以实现较好的荧光信噪比。

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